Insight into the Complexation Mode of Bis(nitrilotriacetic acid) (NTA) Ligands with Ni<sup>2+</sup>Involved in the Labeling of Histidine-Tagged Proteins
作者:Marie Brellier、Bernard Barlaam、Charles Mioskowski、Rachid Baati
DOI:10.1002/chem.200901213
日期:2009.11.23
Herein, we present a rational explanation for the observed stability of the ternary complex involving the postulated bis‐NTA–(Ni2+)2 species and multivalent polyhistidine tags. We have found that prior to the formation of the ternary complex, the Ni2+‐preloading step of bis‐NTA ligands does not form the expected bis‐NTA–(Ni2+)2 exclusively. Instead of the major formation of bis‐NTA–(Ni2+)2 species
根据文献报道和我们自己的发现,发现新的Ni 2+预加载的双(亚硝酸三乙酸)(NTA)配体与带有多组氨酸标签的蛋白的结合具有一到两个数量级的幅度。与单个Ni 2+预载NTA部分的结合相比,亲和力增加。尽管引入了第二个NTA螯合基团,但观察到的协同作用小于理论最大值。在这里,我们对涉及假定的bis-NTA-(Ni 2+)2物种和多价多组氨酸标签的三元复合物的观察到的稳定性提供了合理的解释。我们发现,在三元络合物形成之前,Ni 2+bis-NTA配体的预加载步骤并不能完全形成预期的bis-NTA-(Ni 2+)2。不是主要形成bis-NTA-(Ni 2+)2物种,而是主要形成环状的离散的1:1和2:2实体。建议这些物种在开环时与多价组氨酸标签相互作用。这种现象的发生说明涉及bis-NTA配体的三元复合物的亲和力总体上增加了一到两个数量级。