摘要:
氨基酸和肽的对硝基苯胺广泛用作发色底物,用于确定蛋白水解酶的活性。但是,对硝基苯胺的制备并不容易,部分原因是对硝基苯胺的氨基的亲核性低。研究了通过固相法轻松制备对硝基苯胺类似物的方法。使用5-氨基-2-硝基苯甲酸(Anb5,2)代替对硝基苯胺(pNA)制备对硝基苯胺类似物。通过2-(H-苯并三唑-1-基)-1,1,3,3-四甲基溴化四氟硼酸酯(TBTU)方法将Anb5,2引入到对甲基苯甲胺树脂上而不保护Anb5,2的氨基对-二甲基氨基吡啶的存在。Nalpha,NG保护的精氨酸与Anb5的偶联反应,用普通的偶联方法(例如碳二亚胺和二苯基磷酰基叠氮化物方法)很难获得2-树脂,但是磷酰氯方法比较成功。胰蛋白酶水解合成的苯甲酰基-Arg-Anb5,2-NH2和苯甲酰基-Arg-pNA,两种反应混合物均表现出相同的光谱特性。HD-Val-Leu-Arg-Anb5,2-NH2是人尿激肽释放酶底物的类似