A fluorescent HTS assay for phosphohydrolases based on nucleoside 5′-fluorophosphates: its application in screening for inhibitors of mRNA decapping scavenger and PDE-I
作者:M. R. Baranowski、A. Nowicka、J. Jemielity、J. Kowalska
DOI:10.1039/c6ob00492j
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Several nucleotide-specific phosphohydrolases can cleave P–F bonds in substrate analogues containing a fluorophosphate moiety to release fluoride ions. In this work, by employing a fluoride-sensitive molecular sensor, we harnessed this cleavage reaction to develop a fluorescence assay to screen for phosphohydrolase inhibitors. The assay is rapid, sensitive, and based on simple and synthetically available
几种核苷酸特异性的磷酸水解酶可以裂解包含氟磷酸部分的底物类似物中的PF键,从而释放出氟离子。在这项工作中,通过采用对氟化物敏感的分子传感器,我们利用了这种裂解反应来开发荧光分析法,以筛选磷酸水解酶抑制剂。该测定是快速,灵敏的,并且基于简单且可合成获得的试剂。该测定法适用于高通量筛选(HTS)格式,并且通过针对两种酶筛选小核苷酸的“内部”文库证明了其实用性:DcpS,DcpS,一种不依赖金属的组氨酸三联体脱帽焦磷酸酶(HIT) ) 家庭; PDE-I,一种二价阳离子依赖性核酸酶。我们的筛选结果与DcpS和PDE-I的已知特异性一致,50个值。对于DcpS,我们还通过使用天然底物的替代方法验证了结果。值得注意的是,此处介绍的检测方法是针对DcpS的第一种基于荧光的HTS适应性检测方法,DcpS是脊柱肌肉萎缩症的既定治疗靶标。该测定法应可用于磷酸水解酶的特异性分析和抑制剂的发现,特别是在DcpS