Procédé d'analyse d'une séquence spécifique d'ADN ou d'ARN, réactifs et nécessaires pour sa mise en oeuvre
申请人:INSTITUT NATIONAL DE LA SANTE ET DE LA
RECHERCHE MEDICALE (INSERM)
公开号:EP0362042A1
公开(公告)日:1990-04-04
Selon le procédé de l'invention, une séquence d'ADN ou d'ARN marquée est fixée par affinité ou par hybridation spécifiques, simultanément ou successivement, sur un conjugué d'un marqueur ou d'une séquence nucléotidique spécifique et d'une enzyme capable de produire un composé nucléotide intermédiaire, utilisable par un système de bioluminescence, et sur support présentant une surface poreuse et/ou fibreuse et présentant à sa surface notamment les enzymes luciférase et oxydoréductase dudit système de bioluminescence, dans des conditions telles que la quantité d'enzyme du conjugué ainsi amenée au niveau du support soit en relation directe avec la quantité d'ADN ou d'ARN à analyser, pour y produire, en présence des réactifs nécessaires, un signal de bioluminescence permettant l'analyse. Ce procédé utilise de préférence des réactions d'amplification d'au moins certaines des séquences nucléotidiques mises en oeuvre.
Application à la détection et au dosage par bioluminescence de séquences spécifiques d'ADN ou d'ARN, sans étape de séparation ou de lavage.
根据本发明的工艺,标记的 DNA 或 RNA 序列通过亲和或特异性杂交,同时或相继固定在标记物或特异性核苷酸序列和能够产生可被生物发光系统使用的中间核苷酸化合物的酶的共轭物上、并在具有多孔和/或纤维状表面并在其表面上特别具有上述生物发光系统的荧光素酶和氧化还原酶的载体上,在这样的条件下,使轭合物的酶的数量达到载体的水平与要分析的 DNA 或 RNA 的数量直接相关,以便在存在必要试剂的情况下,在载体上产生允许分析的生物发光信号。这一过程最好至少使用部分核苷酸序列的扩增反应。
应用于特定 DNA 或 RNA 序列的生物发光检测和分析,无需分离或洗涤步骤。