摘要:
我们设计了允许细胞裂解物中相互作用蛋白选择性交联 (S-CROSS) 的分子,并通过凝胶内荧光扫描对捕获的复合物进行灵敏检测。S-CROSS 需要将假定的相互作用蛋白表达为与 CLIP 标签或 SNAP 标签的融合,这两种蛋白质标签可以用合成探针进行特异性标记。包含通过荧光团连接的两个标签底物的双功能分子用于选择性地交联细胞裂解物中的相互作用蛋白质。然后可以在 SDS 凝胶电泳后通过凝胶内荧光扫描定量捕获复合物的数量。在对交联反应进行详细动力学分析的基础上,我们表明交联效率可以作为两种蛋白质相互作用的指标,从而允许明确识别相互作用的蛋白质对。我们通过选择性交联确认许多相互作用来验证我们的方法,并表明它允许对多个同型和异型蛋白质复合物进行定量和同时分析,以及强弱蛋白质-蛋白质相互作用之间的区别。