申请人:BIO-AFFINITY SYSTEMS, INC.
公开号:WO1989008830A1
公开(公告)日:1989-09-21
(EN) A novel sequencing method which exploits the thioacylation degradation of polypeptides and proteins is disclosed. The process involves reaction of the N-terminal amino acid of a polypeptide with an excess of a thioacylating reagent. After sufficient time to insure quantitative coupling and removal of excess reagent, the N-thioacyl polypetide is subjected to cleavage by acid which affords a 2-substituted-5(4H)-thiazolinone of the N-terminal amino acid. Subsequent addition of a large excess of an aliphatic primary or secondary alcohol, either directly to the cleavage acid or after its removal, yields the corresponding N-thioacyl amino acid ester, a stable compound suitable for chromatographic separation and subsequent detection by contemporary methods of high pressure liquid chromatography.(FR) On a mis au point un nouveau procédé de mise en séquence exploitant la dégradation de la thioacylation de polypeptides et de protéines. Le procédé met en ÷uvre la réaction de l'amino acide à terminaison N d'un polypetide avec un excédent d'un réactif de thioacylation. Après un temps suffisant pour assurer l'accouplement quantitatif et l'élimination de réactif excédentaire, on soumet le polypeptide de N-thioacyle au clivage par de l'acide, ce qui permet d'obtenir un 5(4H)-thiazolinone à substitution en 2 de l'amino acide à terminaison N. L'addition ultérieure d'un gros excédent d'alcool aliphatique primaire ou secondaire, soit directement à l'acide de clivage soit après son élimination, produit l'ester d'amino acide de N-thioacyle correspondant, un composé stable approprié pour la séparation chromatographique et la détection ultérieure par des procédés actuels de chromatographie liquide à haute pression.