proteins PARPs modify. Here we report clickable NAD analogues that can be used to label PARP substrate proteins. The clickable NAD analogues have a terminal alkyne group which allows the conjugation of fluorescent or affinity tags to the substrate proteins. Using this method, PARP-1 and tankyrase-1 substrate proteins were labeled by a fluorescent tag and visualized on SDS-PAGE gel. Using a biotin affinity
聚 (
ADP-
核糖) 聚合酶 (PARP) 催化多个
腺嘌呤二
磷酸核糖 (
ADP-
核糖) 单位从烟酰胺
腺嘌呤二核苷酸 (
NAD) 转移到底物蛋白质。人类有 17 个 PARP。已知几种 PARPs,如 PARP-1 和 Tankyrase-1,在 DNA 修复、转录、有丝分裂和端粒长度维持中发挥重要作用。为了在分子
水平上更好地理解 PARPs 的功能,有必要了解 PARPs 修饰的底物蛋白。在这里,我们报告了可用于标记 PARP 底物蛋白的可点击
NAD 类似物。可点击的
NAD 类似物有一个末端炔基,它允许荧光或亲和标签与底物蛋白结合。使用这种方法,PARP-1 和tankyrase-1 底物蛋白被荧光标签标记并在
SDS-PAGE 凝胶上可视化。使用
生物素亲和标签,我们能够分离和鉴定总共 79 种蛋白质作为潜在的 PARP-1 底物。这些包括已知的 PARP-1 底物蛋白,包括组蛋白和异质