摘要:
由蛋白质框架和合成荧光团组成的半合成荧光生物传感器是用于特异性检测生物相关分子的强大分析工具。我们在此报告了一种允许以一步方式构建开启荧光半合成生物传感器的新方法。该策略基于配体定向甲苯磺酰 (LDT) 化学,这是一种新型的亲和引导蛋白质标记方案,可以将合成探针定点地引入蛋白质表面,同时释放亲和配体。新型淬灭配体定向甲苯磺酸酯 (Q-LDT) 试剂是通过将有机染料连接到蛋白质配体和荧光淬灭剂的偶联物通过甲苯磺酰基接头而设计的。Q-LDT 介导的标记直接将天然蛋白质转化为荧光标记的蛋白质,该蛋白质与裂解的配体栓系猝灭剂保持非共价复合。这种标记蛋白质的荧光最初被淬灭,并且由于配体-淬灭剂片段的排出,只有在特定分析物存在时,荧光才会增强(打开)。使用单个标记步骤,该方法成功应用于碳酸酐酶 II (CAII) 和 Src 同源 2 (SH2) 域,以分别生成针对 CAII 抑制剂和磷酸酪氨酸肽的开