摘要:
氨酰基-tRNA蛋白质转移酶催化氨基酸向蛋白质的翻译后添加。真细菌亮氨酰/苯丙氨酰-tRNA蛋白转移酶(L / F转移酶)催化亮氨酸或苯丙氨酸从它们各自的氨基酰化tRNA转移到具有N端赖氨酸或精氨酸氨基酸的底物蛋白的N-末端。定量L / F转移酶活性的常规测定法涉及测量放射性氨基酸掺入底物蛋白中的方法。我们已经开发了定量基质辅助激光解吸/电离飞行时间(MALDI-TOF)质谱程序,以测量L / F转移酶的酶活性。该程序利用了稳定的同位素标记的底物和内标肽。该方法用于确定动力学参数。k cat和K m用于将苯丙氨酸和三种非天然氨基酸衍生物从氨酰基tRNA酶促转移至肽底物。