摘要:
大量的荧光杂交探针包括嵌入染料,例如噻唑橙(TO)。通常,TO在合成后与核酸偶联,这严重限制了其用途。在这里,我们已经开发出一种亚磷酰胺单体,10,和制备2'-OME-RNA探针,标记有5-(反式- ñ己烯-1-基- ) - TO-2'-脱氧-尿苷核苷,杜TO,(带有一个互配部分的核苷,NIC),用于选择性mRNA检测。我们研究了针对细胞周期蛋白D1 mRNA的一系列15-mer 2'-OMe-RNA探针,该探针在不同位置含有一个或多个dU TO。dU的TO与互补RNA杂交时,-2'-OMe-RNA与单独的寡聚物相比,TO发射强度最多提高7倍。该NIC探针用于特异性检测癌细胞中总RNA提取物(250 ng /μl)中极少量的乳腺癌标志物cyclin D1 mRNA。此外,发现该NIC探针优于我们相关的NIF(具有固有荧光的核苷)探针,该探针只能在高浓度(1840 ng /μl)下检测细胞周期蛋白D1