Purification and Characterization of TrzF: Biuret Hydrolysis by Allophanate Hydrolase Supports Growth
作者:Nir Shapir、Gang Cheng、Michael J. Sadowsky、Lawrence P. Wackett
DOI:10.1128/aem.72.4.2491-2495.2006
日期:2006.4
family. TrzF was highly active in the hydrolysis of allophanate but was not active with urea, despite having been previously considered a urea amidolyase. TrzF showed lower activity with malonamate, malonamide, and biuret. The allophanate hydrolase from Pseudomonas sp. strain ADP, AtzF, was also shown to hydrolyze biuret slowly. Since biuret and allophanate are consecutive metabolites in cyanuric acid metabolism
克隆TrzF,即阴沟肠杆菌菌株99的脲基甲酸酯水解酶,在伴侣蛋白存在下过表达,并纯化至同质。天然TrzF具有65,401的亚基分子量和α(2)的亚基化学计量,并且不包含大量的金属。TrzF对二氨基磷酸氨基苯酯具有时间依赖性抑制作用,是酰胺酶标志蛋白家族的成员。TrzF在脲基甲酸酯的水解中具有很高的活性,但是对尿素没有活性,尽管以前被认为是脲酰胺酶。TrzF对丙二酸,丙二酰胺和缩二脲的活性较低。来自假单胞菌属的脲基甲酸酯水解酶。还显示菌株ADP AtzF缓慢水解缩二脲。由于缩二脲和脲基甲酸酯是氰尿酸代谢中的连续代谢物,缩二脲水解酶活性水平低可能具有生理学意义。包含atzD的重组大肠杆菌菌株,该菌株编码产生缩二脲的氰尿酸水解酶,而atzF在作为氮源的氰尿酸上缓慢生长。产生的生长量与从氰尿酸中释放出3摩尔氨水一致。在体外,TrzF被证明可以水解缩二脲以释放3摩尔的氨。TrzF的缩二脲的水解活性在