or a fluorophore. While extending the substrate scope of RNA transglycosylases to include DNA would enable numerous applications, it has been previously reported that TGT is incapable of modifying native DNA. Here, we demonstrate that TGT can in fact recognize and label specific DNA substrates. Through iterative testing of rationally mutated DNA hairpin sequences, we determined the minimal sequence requirements
细菌 tRNA
鸟嘌呤转糖基酶 (TGT) 催化
鸟嘌呤与 7-脱氮
鸟嘌呤队列前体 prequeuosine1 (preQ1) 的交换。虽然细菌 TGT 的天然核酸底物是队列同源 tRNA 的反密码子环,但该酶的最小识别序列是一个结构化的发夹,其中包含“UGU”环基序中的目标 G 核碱基。之前的工作建立了 RNA 修饰系统 RNA-TAG,其中大肠杆菌TGT 将感兴趣的 RNA 上的目标 G 交换为与小分子报告
基因(如
生物素或荧光团)相连的
化学修饰的 preQ1 底物。虽然将 RNA 转糖基酶的底物范围扩展到包括 DNA 将使许多应用成为可能,但之前有报道称 TGT 不能修饰天然 DNA。在这里,我们证明 TGT 实际上可以识别和标记特定的 DNA 底物。通过对合理突变的 DNA 发夹序列的反复测试,我们确定了大肠杆菌对未修饰 DNA 进行转糖基化的最低序列要求TGT。控制 DNA 发夹中的