5-carboxylcytosine (5caC), are still unclear due to the extremely low abundance in biological samples. In this work, a series of novel hydrazine-based reagents, which held a hydrazine group as the reaction group, a hydrophobic triazine group, and two easily charged tertiary amine groups with different alkyl chains for adjusting the hydrophobicity of the labeling reagents, were first explored to label
修饰的
胞嘧啶是重要的表观遗传标记,可在活
生物体的多种细胞过程中发挥关键作用。但是,由于
生物学样品中的丰度极低,稀有修饰的
胞嘧啶的
生物学功能,尤其是5-甲酰基
胞嘧啶(5fC)和5-羧基
胞嘧啶(5caC)的某些功能仍不清楚。在这项工作中,首先是一系列基于
肼的新型试剂,该试剂以
肼基为反应基团,疏
水性三嗪基团和两个带有不同烷基链的易带电荷的叔胺基团来调节标记试剂的疏
水性。探索标记稀有修饰的
胞嘧啶,如5fC和5caC。5fC与标记试剂之间的衍生反应非常快,仅通过涡旋而无需额外的反应时间,就可以实现超过99%的衍生化效率。5fC的检测灵敏度随着标记试剂疏
水性的增加而增加,其中最好的试剂显着提高了125倍。检测限低至10 amol,实现了对5fC的全
基因组最敏感的整体定量。此外,标记试剂还成功地用于检测5caC,灵敏度提高了100倍。通过这种方法,我们仅使用约600 ng的
基因组DNA就可以在不同的哺乳