[EN] INTRACELLULAR MARKER FOR PURIFICATION OF STEM CELLS<br/>[FR] MARQUEUR INTRACELLULAIRE DE PURIFICATION DE CELLULES SOUCHE
申请人:THE JOHNS HOPKINS UNIVERSITY SCHOOL OF MEDICINE
公开号:WO1996036344A1
公开(公告)日:1996-11-21
(EN) An intracellular enzyme, cytosolic aldehyde dehydrogenase, expressed at high levels in primitive stem cells, appears to play an important role in allowing these cells to be resistant to cyclophosphamide. A fluorescent cell-permeable, non-polar aldehyde oxidized intracellularly by ALDH is used to identify human stem cells that are then isolated. For instance, a non-polar aldehyde, such as dansyl aminoacetaldehyde, serves as a substrate for an intracellular ALDH. Bone marrow progenitor stem cells treated with DAAA proliferate normally. Bone marrow cells expressing high levels of dansyl fluorescence after incubation with DAAA and sorted based upon dansyl fluorescence, preferably using an automated fluorescence cell sorting technique such as FACS, are substantially enriched for pluripotent hematopoietic progenitor stem cells. By this method, an enriched cellular composition comprising human lymphohematopoietic stem cells can be obtained. The cell population is capable of self-regeneration in a co-culture medium and of differentiation into various lymphoid hematopoietic lineages.(FR) Enzyme intracellulaire, aldéhyde déshydrogénase cytosolique, exprimée à des niveaux élevés dans des cellules souche primitives et jouant un rôle important en ce qu'elle confère à ces cellules une résistance à cyclophosphamide. On utilise un aldéhyde fluorescent, à perméabilité cellulaire, non polaire et oxydé dans la cellule par ALDH, afin d'identifier les cellules souche de l'homme, qu'on isole ensuite. Par exemple, un aldéhyde non polaire, tel que dansyle aminoacétaldéhyde, sert de substrat pour un ALDH intracellulaire. Les cellules souche parentes de la moelle osseuse traitées avec DAAA prolifèrent normalement. Les cellules de moelle osseuse exprimant des niveaux élevés de fluorescence de dansyle après incubation avec DAAA et triées sur la base de fluorescence de dansyle, de préférence, au moyen d'une technique automatisée de tri de cellules par fluorescence, telle que FACS, sont sensiblement enrichies de cellules souche parentes hématopoïétiques multipotentes. Ce procédé permet d'obtenir une composition cellulaire enrichie comprenant des cellules souche lymphohématopoïétiques de l'homme. La population cellulaire est capable d'autorégénération dans un milieu de culture composite et de différenciation en différentes lignées hématopoïétiques lymphoïdes.