chymotrypsin | 9004-07-3

• 物质功能分类: 生物化工 - 酶及辅酶类
• 分子结构分类: 水解酶 - 作用于肽键（肽酶） - 丝氨酸内肽酶
• 英文名称: chymotrypsin
• 英文别名: chymotrypsins A and B；alpha-chymar ophth；avazyme；chymar；chymotest；enzeon；quimar；quimotrase；alpha-chymar；alpha-chymotrypsin A；alpha-chymotrypsin；α-chymotrypsin (EC 3.4.21.1)
• CAS: 9004-07-3

物化性质

• 熔点：
  127°C
• 密度：
  1.37[at 20℃]
• 溶解度：
  在1mMHCl中复溶。在1mMHCl中溶解度为10mg/ml。2mM氯化钙用作稳定剂。在-20°C下储存分装的溶液长达一周。
• LogP：
  -1.3 at 20℃
• 稳定性/保质期：
  1. 避免湿、热和高温，这些因素对蛋白质的温度、pH值以及导致蛋白质变性的其他因素都极为敏感，容易因外界条件变化而改变其结构和性质。 2. 在常温常压下，蛋白质较为稳定。

安全信息

• TSCA：
  Yes
• 危险品标志：
  Xn,B
• 安全说明：
  S22
• 危险类别码：
  R36/37/38,R42/43,R42
• WGK Germany：
  1,3
• 海关编码：
  35079090

制备方法与用途

糜蛋白酶的制备过程 提取与初步纯化

1. 提取：将牛胰用冰冷硫酸进行提取。
2. 分级盐析：通过调整硫酸铵浓度（分别使用40%和70%饱和度）来沉淀糜蛋白酶原，再通过结晶进一步纯化。

活化与二次纯化

1. 活化：加入胰蛋白酶并控制pH值，使糜蛋白酶原活化为糜蛋白酶。
2. 盐析及结晶：用硫酸调节pH至约4后，进行第二次盐析，再通过多次结晶获得高纯度的糜蛋白酶。

最终精制

1. 透析：将得到的糜蛋白酶溶液装入透析袋中，在低温下进行连续透析，以去除小分子杂质。
2. 冷冻干燥与灭菌：对透析后的糜蛋白酶液进行冷冻和减压干燥，并通过高温或其它方式灭菌，最终获得成品。

制备过程详细步骤

1. 提取液的制备

   • 用冰冷硫酸处理牛胰以提取其中的蛋白质。

2. 分级盐析与结晶

   • 分别使用40%和70%饱和度的硫酸铵进行初步分级沉淀，随后通过多次结晶获得高纯度的糜蛋白酶原。

3. 活化

   • 将糜蛋白酶原在适当条件下加入胰蛋白酶并控制pH值以促进其活化。

4. 盐析与结晶

   • 使用硫酸调节pH至约4，进行第二次盐析，并通过多次结晶获得高纯度的糜蛋白酶。

5. 透析

   • 将得到的糜蛋白酶溶液装入透析袋中，在低温条件下连续透析以进一步精制。

6. 冷冻干燥与灭菌

   • 经过彻底精制后的糜蛋白酶液通过冷冻、减压干燥及高温或其他方式进行灭菌，最终获得成品。

注意事项

• 在整个过程中需注意pH值的控制和温度的变化，以确保产物的质量。
• 确保所有操作都在无菌条件下进行，防止微生物污染。
• 每一步骤都要彻底清洗设备并避免交叉污染。

反应信息

• 作为试剂：
  描述：

  N-[(苯基甲氧基)羰基]-L-酪氨酸乙酯 、 甘氨酸甲酯盐酸盐 在 chymotrypsin 、 水 、 三乙胺 作用下， 以 环己烷 为溶剂， 反应 72.0h， 以59%的产率得到Z-L-Tyr-Gly-OMe
  参考文献：
  名称：

  有机溶剂中 MCM-22 固定化或游离蛋白酶催化的生物活性五肽 OGP-(10-14) 前体和脑啡肽片段的合成

  摘要：

  成骨生长肽片段 (10-14) 的前体 Z-Tyr-Gly-Phe-Gly-Gly--OEt 的全酶合成是使用固定化蛋白酶在分子筛 MCM-22 上通过吸附作为催化剂通过 3+ 2合成路线首次。固定化酶的重复使用时间取决于具体的反应体系。与游离酶相比，大多数情况下固定化酶催化的反应速率明显提高，合成产率也有所提高。含水量和Et 3 N的添加量对固定化酶合成OGP-(I 0-14)和脑啡肽等生物活性肽片段的影响与游离酶不同。

  DOI：

  10.1055/s-2002-25762