摘要:
为了阐明 pepducins(人工脂肽 G 蛋白偶联受体 (GPCR) 调节剂)直接跨膜渗透的机制,我们开发了两种类型的基于 FRET 的探针,Pep13-FL-SS-Dab (13),靶向内层小叶脂质双层和 Pep13-Dab-SS-FL (14) 分别靶向细胞质。它们由 pepducin 部分和荧光开关组件组成,荧光开关组件由作为荧光团的 5(6)-羧基荧光素 (FAM) 和通过二硫键连接的 dabcyl 作为猝灭剂组成。当它们内化到细胞质中时,细胞内谷胱甘肽可以裂解二硫键以释放猝灭剂,从而产生开启荧光信号。使用这些探针,我们首次对 MCF-7 细胞上 pepducins 的跨双层运动进行了活细胞成像。结果表明,探针的脂质部分促进pepducin 翻转并束缚在膜上。本研究提出了将探针结构应用于直接细胞内药物递送的可能性。