琥珀酸脱氢酶(SDH)简介
琥珀酸脱氢酶(succinate dehydrogenase, SDH),又称琥珀酰辅酶Q还原酶,是一种关键的线粒体酶复合物。它位于线粒体内膜,在氧化磷酸化和细胞内氧传感及信号传导中起着重要作用。SDH是三羧酸循环与有氧电子传递呼吸链之间的交汇点,在三羧酸循环中催化琥珀酸盐转化为延胡索酸,并参与电子传输链,从而在细胞代谢中扮演重要角色。
琥珀酸脱氢酶由四个亚单位构成:黄素蛋白 SDHA、铁硫蛋白 SDHB、整合膜蛋白 SDHC 和整合膜蛋白 SDHD。这四个亚单位分别由相应的核基因编码。SDHA 和 SDHB 是亲水性蛋白,形成酶催化中心;而 SDHC 和 SDHD 是疏水性蛋白,将 SDH 四聚体复合物锚定在线粒体内膜上,并作为辅酶 Q 的结合位点。
此外,琥珀酸脱氢酶也是一种公认的肿瘤抑制基因。在 SDH 复合物中的任何一个亚单位缺失都会导致该复合物的不稳定性和功能受损。
琥珀酸脱氢酶检测检测方法
琥珀酸脱氢酶的检测方法主要包括光度法、电化学法和荧光法等。
光度法:最常用的方法之一,基于琥珀酸脱氢酶催化反应中产生的 NADH 的吸光度变化。通过测定 NADH 的吸光度可以间接评估琥珀酸脱氢酶的活性及样品中的琥珀酸含量。
电化学法:利用琥珀酸脱氢酶催化反应中产生的电流变化来定量分析琥珀酸的含量。
荧光法:通过检测琥珀酸脱氢酶催化反应中产生的荧光信号来测定琥珀酸的含量。
琥珀酸脱氢酶检测试剂盒
试剂盒主要用于测定多种组织、细胞和分离线粒体中的 SDH 活性。其原理是通过产生与存在的酶活性成比例的 600 nm 吸光度的产物来确定 SDH 的活性。一个单位的 SDH 是在 pH7.2,温度为 25℃ 下每分钟产生 1.0 μmole DCIP 的酶量。
琥珀酸脱氢酶染色染色方法
琥珀酸脱氢酶反应可采用多种染色法,如 Pearson 二甲亚砜法、Nachlas 硝基蓝四唑法和 Gobel 改良的 Rutenberg-Waoman-Seligman 法。其中 Nachlas 硝基蓝四唑法较为常用。
该方法主要用于检测琥珀酸脱氢酶在所有有氧呼吸细胞中的存在,尤其是心肌、肾小管上皮细胞及肝细胞含量丰富。此酶牢固结合于线粒体内膜,最适 pH 为 7.6。由于其对固定剂的敏感性较高,因此需使用新鲜组织并低温恒冷切片。