摘要:
蛋白质结合的遗传编码方法作为生物工具非常重要。在这里,我们描述了一类用于基因编码标记的新型染料的开发,这些染料通过 HaloTag 方法增加了蛋白质报告和检测的新功能。寡脱氧氟苷 (ODF) 是短的 DNA 样寡聚物,其中天然核酸碱基被相互作用的荧光发色团取代,使用单一激发波长产生广泛的发射颜色。我们描述了与卤代烷脱卤酶相容的氯代烷烃接头亚磷酰胺衍生物的开发,该衍生物能够快速自动合成许多可能的蛋白质偶联染料。进行了在体外测试九种不同的 DNA 样染料与具有 HaloTag 结构域的蛋白质的酶促自偶联的实验,数据证实了蛋白质的快速有效共价标记。值得注意的是,发现许多 ODF 染料在蛋白质缀合时会增加亮度或改变颜色。在哺乳动物细胞环境中的测试表明,这些染料在细胞表面和细胞质内的多种细胞环境中都具有功能,允许通过落射荧光和激光共聚焦显微镜对活细胞中的蛋白质定位进行成像。