摘要:
为了利用酶促方法合成 β-羟基-α-氨基酸,克隆了编码大肠杆菌 l-苏氨酸醛缩酶 (LTA;EC 2.1.2.1) 和米黄杆菌 d-苏氨酸醛缩酶 (DTA) 的基因,并通过引物指导的聚合酶链反应在大肠杆菌中过表达。研究了纯化的重组酶的动力学、特异性、稳定性、添加剂要求、温度分布和 pH 依赖性。DTA 需要镁离子作为辅助因子,而 LTA 不需要金属离子。这些酶在浓度高达 40% 的 DMSO 存在下工作良好,并且观察到 DMSO 诱导的 LTA 催化反应的速率加速。这两种酶都使用磷酸吡哆醛辅酶来激活甘氨酸以与多种醛反应。LTA 得到赤-β-羟基-α-l-氨基酸与脂肪醛和苏式异构体与芳香醛作为动力学控制的产物。另一方面,DTA 形成苏-β-羟基-α-d-氨基酸作为动力学c...