Use of a Phosphatase-Like DT-Diaphorase Label for the Detection of Outer Membrane Vesicles
作者:Andi Muhammad Ichzan、Sohee Lee、Chiew San Fang、Ponnusamy Nandhakumar、Hyeri Ha、Jung Min Joo、Kwang-sun Kim、Haesik Yang
DOI:10.1021/acs.analchem.9b00064
日期:2019.4.2
sandwich probes, respectively. The absorbance change in a solution containing 4-nitrophenyl phosphate indicates that dephosphorylation occurs in the presence of both DT-D and NADH. Among the three phosphate-containing substrates [4-aminophenyl phosphate, ascorbic acid phosphate, and 1-amino-2-naphthyl phosphate (ANP)] that can be converted into electrochemically active products after dephosphorylation
已知DT-黄递酶(DT-D)主要催化醌和硝基(so)化合物的双电子还原。需要检测含有热解脂多糖(LPS,也称为内毒素)的革兰氏阴性细菌外膜囊泡(OMV),以评估分析样品的毒性作用。在这里,我们报告DT-D具有很高的去磷酸化活性:DT-D在NADH的存在下催化含磷酸盐的底物的还原性去磷酸化。我们还报告说,使用DT-D和两个相同的LPS结合抗体分别作为催化标记和两个夹心探针的夹心式电化学免疫传感器,可以实现灵敏且简单的OMV检测。含有4-硝基苯基磷酸酯的溶液中的吸光度变化表明,在同时存在DT-D和NADH的情况下会发生去磷酸化。可以在脱磷酸后转化为电化学活性产物的三种含磷酸盐的底物[4-氨基苯基磷酸盐,抗坏血酸磷酸盐和1-氨基-2-萘基磷酸盐(ANP)]中,ANP显示出最高的电化学信噪比。本底比率,因为(i)DT-D对ANP的脱磷酸作用很快,(ii)即使在裸露的铟锡氧化物下,脱磷酸化产物(1-