摘要:
                                细胞色素 P450(P450)物种在异种生物的代谢过程中发挥着重要作用,而检测 P450 的活性对于评估药物和食品中化学物质的毒性非常重要。然而,随着样品数量的增加和样品量的减少,样品溶液的引入和混合所造成的滞后时间会成为误差的来源。为了克服这一技术障碍,我们开发了一种使用光保护(笼状)化合物对 P450 的活性进行光调节的方法。我们合成了烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸(NADP+)和 6-磷酸葡萄糖(G6P)的笼状分子,它们参与生成 NADPH(P450 的辅助因子)。在紫外线照射前,使用笼装 G6P 可完全阻断 P450 的催化反应,而笼装 NADP+ 则会导致少量的背景反应。紫外线照射后,90% 以上的酶活性得以恢复。使用笼式-G6P 可以在隔离的微室(宽 50 μm;高 50 μm)中进行测定,方法是提前封装必要的成分,并通过紫外线照射启动反应。在一个微室中就能观察到酶反应的起始过程。尽量减少溶液的引入和混合所造成的不确定性,大大降低了所得动力学常数的误差。