N 6 -甲基腺苷 (m 6 A) 是细胞 RNA 中重要的修饰核苷,与多种细胞过程相关,并与疾病有关。与 m 6 A 动态安装和去除相关的酶是药物研究中重点研究的目标,这需要详细了解蛋白质对 m 6 A 的识别模式。在这里,我们利用 m 6 A 的原子诱变系统地研究了两种人类 m 6 A 去甲基化酶 FTO 和 ALKBH5 的机制以及 YTH 阅读器蛋白 YTHDF2/DC1/DC2 的结合模式。原子诱变是指通过化学合成引入的原子特异性变化,例如用碳原子取代氮。通过固相合成制备含有位点特异性掺入的1-脱氮-、3-脱氮-和7-脱氮-m 6 A核苷的合成RNA寡核苷酸,并评估它们的RNA结合和重组蛋白的去甲基化。我们发现底物识别和转化存在明显差异,并揭示了酶活性的结构偏好。这项工作中引入的 deaza m 6 A 类似物将成为 m 6 A 研究中其他蛋白质的有用探针。
N 6 -甲基腺苷 (m 6 A) 是细胞 RNA 中重要的修饰核苷,与多种细胞过程相关,并与疾病有关。与 m 6 A 动态安装和去除相关的酶是药物研究中重点研究的目标,这需要详细了解蛋白质对 m 6 A 的识别模式。在这里,我们利用 m 6 A 的原子诱变系统地研究了两种人类 m 6 A 去甲基化酶 FTO 和 ALKBH5 的机制以及 YTH 阅读器蛋白 YTHDF2/DC1/DC2 的结合模式。原子诱变是指通过化学合成引入的原子特异性变化,例如用碳原子取代氮。通过固相合成制备含有位点特异性掺入的1-脱氮-、3-脱氮-和7-脱氮-m 6 A核苷的合成RNA寡核苷酸,并评估它们的RNA结合和重组蛋白的去甲基化。我们发现底物识别和转化存在明显差异,并揭示了酶活性的结构偏好。这项工作中引入的 deaza m 6 A 类似物将成为 m 6 A 研究中其他蛋白质的有用探针。