T4DNA连接酶 | 9015-85-4

• 物质功能分类: 生物 - 技术服务 - 核酸相关
• 分子结构分类: 连接酶 - 形成磷酸酯键 - 形成磷酸酯键的连接酶（迄今为止仅鉴定出亚类）
• 中文名称: T4DNA连接酶
• 中文别名: T4 DNA连接酶
• 英文名称: DNA ligase (ATP)
• 英文别名: polydeoxyribonucleotide synthase (ATP)；polynucleotide ligase (ambiguous)；sealase；DNA repair enzyme (ambiguous)；DNA joinase (ambiguous)；DNA ligase (ambiguous)；deoxyribonucleic ligase (ambiguous)；deoxyribonucleate ligase (ambiguous)；DNA-joining enzyme (ambiguous)；deoxyribonucleic-joining enzyme (ambiguous)；deoxyribonucleic acid-joining enzyme (ambiguous)；deoxyribonucleic repair enzyme (ambiguous)；deoxyribonucleic joinase (ambiguous)；deoxyribonucleic acid ligase (ambiguous)；deoxyribonucleic acid joinase (ambiguous)；deoxyribonucleic acid repair enzyme (ambiguous)；poly(deoxyribonucleotide):poly(deoxyribonucleotide) ligase (AMP-forming)
• CAS: 9015-85-4

安全信息

• TSCA：
  Yes

制备方法与用途

应用

T4 DNA连接酶可以催化粘端或平端双链DNA或RNA的5′-磷酸末端和3′-羟基末端之间以磷酸二酯键结合。该催化反应需要ATP作为辅助因子，T4 DNA连接酶（T4 Ligase）同样具有这一功能。

概述

T4 DNA连接酶在体外DNA连接、连接检测PCR以及体内冈崎片段连接成完整基因组DNA方面发挥重要作用。基因工程中所使用的DNA连接酶通常由公司提供，其中最常用的是T4 DNA连接酶（T4 Lig）。

连接机理与结构

目前，DNA连接反应的机理基于切口双链DNA底物的研究结果：普遍认为连接反应分为三个步骤：① T4连接酶在ATP供能下生成E-AMP复合物；② E-AMP复合物识别双链DNA切口位置，将AMP转移到5′-磷酸基团上，形成5′-P-AMP复合物；③ 3′-羟基亲核攻击5′-P-AMP形成磷酸二酯键，并释放出AMP。

连接酶分子大小

T4连接酶由T4嗜菌体的第30基因合成，最初是从感染E. coli的T4嗜菌体中提取。后来发现，在DNA复制缺失型嗜菌体中，连接酶产量更高，成为主要来源；目前市场供应的连接酶大多通过基因工程技术生产。

Murry测定T4连接酶分子量为63,000~68,000 Da，Armstrong进一步确定其为55,230 Da，由487个氨基酸残基组成，基因长度1,464 bp（GenBank序列号为X00039）。根据分子量与分子大小的比例关系估算，T4连接酶的大小约为3.4 nm，能够跨越约一个DNA双螺旋长度（即10 bp）。连接酶占据连接端口下游（5′-P端部）7~10 bp，占据端口上游（3′-OH端部）3~5 bp。