摘要:
通过多重序列比对,鉴定了来自Sulfolobus solfataricus P2基因组的具有共有序列Gly-X-Ser-X-Gly的脂解酶的同源物。在三个可能的候选序列中,鉴定了一个(Est3)序列,该序列显示出比指示板上其他酶更高的活性。该基因(est 3)在大肠杆菌中表达,重组蛋白(Est3)通过色谱分离纯化。该酶是三聚体蛋白,其天然结构的单体形式分子量为32 kDa。酯酶的最佳pH和温度分别为7.4和80℃。该酶对C2至C16范围内的各种对硝基苯基酯显示出广泛的底物特异性。苯甲基磺酰氟(PMSF)和磷酸二硝基对硝基苯酯强烈抑制Est3酯酶的催化活性。根据底物特异性和抑制剂的作用,Est3酶被认为是一种羧酸酯酶(EC 3.1.1.1)。具有(+/-)-2-(3-苯甲酰基苯基)丙酸甲酯水解活性为(-)-2-(3-苯甲酰基苯基)丙酸的酶显示出中等程度的对映选择性。反应32小时后,在60摄氏