摘要:
N ε -Acryloyl- l- lysine是一种具有缺电子烯烃的非经典氨基酸,在大肠杆菌中使用吡咯赖氨酰-tRNA 合成酶突变体与 tRNA CUA Pyl协调进行遗传编码。丙烯酰胺部分在细胞中是稳定的,而它的活性足以在体外进行多种独特的蛋白质修饰反应。这些反应包括 1,4-加成、自由基聚合和 1,3-偶极环加成。我们证明了与N ε -丙烯酰基- l结合的蛋白质-赖氨酸在弱碱性条件下被含硫醇的亲核试剂有效修饰,丙烯酰胺部分还允许相同蛋白质在生理 pH 值下快速自由基共聚成聚丙烯酰胺水凝胶。在生理条件下,丙烯酰胺官能团与二芳基腈亚胺发生快速的 1,3-偶极环加成反应以显示开启荧光。我们已经使用这一观察结果证明了在体外和活细胞中与N ε -丙烯酰基-l -赖氨酸结合的蛋白质的位点特异性荧光标记。这一关键的发展允许轻松获得一系列修饰的蛋白质,用于需要高特异性和反应效率的应用。