蛋白质免疫印迹 (WB)

蛋白质免疫印迹（Western Blotting，简称WB）是一种常用的分子生物学技术，用于检测特定蛋白质的存在及其在样本中的表达水平。这项技术结合了凝胶电泳和免疫沉淀的原理，通过一系列步骤实现对样品中目标蛋白的有效鉴定。

首先，从细胞或组织样本中提取总蛋白，并利用SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）对蛋白质进行分离。在该过程中，蛋白质被变性并按照分子量大小分布在凝胶中。

将分离后的蛋白质从凝胶转移到固相支持物上（如PVDF或尼龙膜）。随后，在这些膜上加入非特异性抗体来封闭未结合的活性位点，避免后续步骤中的非特异性结合。

使用针对目标蛋白的一抗与膜进行孵育。一抗能够识别并结合特定的蛋白质分子。之后，用相应的二抗（通常标记有酶或荧光素）对膜上的复合物进行检测。通过化学发光、ELISA或其他方法，可以确定抗体与目标蛋白之间的相互作用。

利用底物显色或激光扫描等技术捕获信号，生成图像以分析蛋白质表达水平及其在不同条件下的变化情况。

WB技术广泛应用于基因表达调控研究、疾病诊断和治疗效果评估等领域。它能够帮助科研人员了解特定蛋白质的表达模式，对药物作用机制进行探索，并为临床诊断提供有价值的参考信息。